ВЛИЯНИЕ ГИПОКСЕНА НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ ЛЕЙКОЦИТОВ

Смирнов B.C.. Петленко С.В., Кузьмин М.К*.

Военно-медицинская академия, Санкт-Петербург, ^Корпорация "Олифен ", Москва

 Исследовали функциональную активность лимфоцитов и нейтрофилов при воздействии на них гипоксена - натриевой соли [поли-(2,5-дигидрооксифенилен)]-4-тиосульфокислоты in vitro. О действии гипоксена на лимфоциты судили по экспрессии дифференцировочных рецепторов CD3, CD4, CDS, CD19, CD56 и активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ). Влияние препарата на функциональное состояние нейтрофилов оценивали по тесту восстановления нитросинего тетразолия (НСТ). Кроме того, исследовали влияние гипоксена на активность лейкоцитов в реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ). Исследования проведены на пробах крови, полученных от 14 практически здоровых мужчин-спортсменов в возрасте от 19 до 29 лет. Лимфоциты выделяли из периферической крови по стандартной методике. Мембранные рецепторы удаляли в результате инкубации лимфоцитов в 0.1% растворе трипсина в течение 10 мин при 37 °С. Сразу же после обработки трипсином лимфоциты отмывали средой RPMI-1640, а затем инкубировали в RPMI-1640, содержавшей 50 мкг/мл гипоксена в течение 30 мин при 37 °С, Дифференцировочные рецепторы определяли методом иммунолюминесценции до, после трипсинизации и после инкубации в присутствии гипоксена (опыт) или физраствора (контроль) Активность СДГ определяли цитохимически по методу Р.П. Нарциссова до и после лимфоцитов в RPMI-1640 с гипоксеном.
 НСТ ставили по стандартной методике, в которой в качестве стимулятора применяли суспензию зимозана. В опытные пробы вносили гипоксен в конечной концентрации 50 мкг/мл, в контрольные - физраствор.
 РТМЛ проводили по стандартной методике в 5-канальных плоскопараллельных капиллярах. В качестве индуктора торможения миграции применяли Кон А, в опытные пробы вносили гипоксен в концентрации 50 мкг/мл, в контрольные аликвотное количество физраствора. Результаты исследований показали, что гипоксен достоверно активировал процессы экспрессии дифференцировочных рецепторов. Наиболее интенсивно репопулировали рецепторы CD3 и CD56 (см. табл.)

Таблица Влияние гипоксена на экспрессию дифференцировочных рецепторов лимфоцитов in vitro (%)

Рецептор Исходно (до трипсинизации) После трипсинизации После инкубации
с гипоксеном с физраствором
CD3 48.41 ±2,75 3.55±1,02* 16,25±2,49*** 10,5±2,56**
CD4 29.61±2.10 2.73±1.41* 4.75±1.49** 3.01±1.12*
CD8 19,08±0,78 2.41 ±0.60* 4,60±1,11** 2,94±0,95*
CD19 18,07±1,71 1,23±0,62* 4,47±0,85** 3,18±1,14*
CD56 10,84±1,49 2,25±0,80* 5,16±0,82*** 3,15±0,69*

 Примечание. Одной звездочкой отмечены достоверные различия по сравнению с исходными значениями, двумя - различия с данными после трипсинизации, тремя - различия с данными после инкубации с физраствором.

Не активность СДГ лимфоцитов гипоксен достоверного влияния не оказывал ( опыт - 21,03±4.72 гранул/ клетку; контроль - 23.28±4.21 гранул/ клетку , Р >0.05). Препарат не изменял показатели НСТ, что свидетельствует об отсутствии влияния гипоксена на процессы выработки активных форм кислорода (базальный уровень: опыт - 0,07±0,01 отн. ед.; контроль - 0,08±0,01 отн. ед; стимулированный уровень: опыт - 1.20±0,11 отн.ед.; контроль-1.17±0,12 отн.ед).
Не выявлено достоверного действия гипоксена на цитокиновую активность лейкоцитов в РТМЛ (опыт - 85,9±3,22 %; контроль - 86,6±2,96 %).
Полученные данные указывают на то, что наблюдаемые при применении гипоксена иммуноло-гические и антиоксидантные эффекты, скорее всего, реализуются путем активации рецептор-ных механизмов регуляции функциональной активности клеток-мишеней. По-видимому, именно этими механизмами можно объяснить низкую токсичность и широкий терапевтический потенциал гипоксена при его применении для лечения широкого круга заболеваний, в основе патогенеза которых лежит нарушение регуляции физиологических процессов. С этих позиций гипоксен можно с достаточным на то основанием отнести к группе средств с биорегулирующим механизмом фармакологического эффекта.

ОПУБЛИКОВАНО: МЕДИЦИНСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ, Т. 3, №2, 2001, С. 338-339